杜鹃花组培技术

2010/12/31 10:41:11

一、杜鹃花组培的基本技术环节
杜鹃花组织培养，通常使用的外植体为茎尖、茎节和花蕾等。国内多采用茎节为初代培养的外植体。
杀菌处理时，杀菌能力较强的升汞（氯化汞）易造成外植体材料的褐变死亡，不宜使用。试验表明，采用饱和的次氯酸钙液上清液或5％的次氯酸钠液作为灭菌剂，效果较好，处理时间为15至20分钟。为加强灭菌效果，还可加入1％的克菌丹或0.1％的吐温－20（山梨糖醇）配合使用。材料灭菌前的预处理，通常采用70％酒精浸泡，不超过30秒。此外，用中性洗涤剂进行材料的预处理，亦可有效降低其灭菌后的污染率。外植材料灭菌流程为：洗衣粉液浸泡20分钟--流水冲洗至清--70％酒精浸泡30秒--灭菌水冲洗1分钟--5％次氯酸钠浸泡15分钟,灭菌水漂洗3次，每次1分钟。如此，可将外植体污染率降低到15％以下。
杜鹃花组培所用培养基，为Andeson改良MS培养基：将MS培养基中的硝酸铵和硝酸钾用量分别减至1／4，取消了碘化钾成分，铁盐的用量增加一倍。因杜鹃花科植物原产于高山酸性土壤，培养基的pH值宜为5.0至5.4。培养室温度25℃，光照强度3000勒克斯，光照时间12至14小时。
杜鹃花在诱芽培养中使用的激素较一般植物有异，需要活性较强的细胞激动素类物质，才能达到满意的效果。试验表明，使用ZT的诱芽效应最为显著；添加KT的处理几乎无丛芽或侧芽发生，仅是原茎尖的伸长；而选用6－BA处理，则导致培养材料的褐变加剧，效果反不如对照。此外，在其后的增殖培养中，杜鹃花对细胞激动素种类的要求，仍以添加ZT为好。
国外在杜鹃花的组培中多使用2ip作为外源细胞激动素，效果较ZT好。但从经济的角度考虑，仍推荐使用ZT。
二、杜鹃花的初代和继代增殖培养
杜鹃花初代诱芽培养，NAA浓度不得超过0.1mg／L，ZT用量的增大对诱芽效应有明显促进作用。但提高ZT浓度时，NAA浓度不宜同步增加，ZT／NAA值较大为好。从经济培养的意义出发，初代培养的激素配比以ZT5＋NAA0.01（mg／L）为宜，培养1个月左右时，诱芽率即可达100％，诱芽系数6.5。

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