寒兰的杂交与无菌播种技术

2011/7/4 16:44:59

日本冈田拓郎先生有关寒兰的杂交与无菌播种的研究结果。
1、杂交组合类型与种子特性
寒兰进行以下3种类型的杂交：
A型：青寒兰品种之间：青寒兰×福娘；
B型：红花系品种之间：武陵（粉红花系）×锦旗（红花系）；
C型：自交组合：武陵×武陵。
（1）杂交与采种
芽花后3～4天雌蕊和雄蕊发育最充实，足进行杂交的最佳时期。杂交的方法足，先进行除雄，即将花柱顶部的花粉块取出除去，再将父本的花粉块放入柱头的塌陷处。原则上1盆有5株以上的生长旺盛的母本植株，只结1个蒴果。
（2）杂交后的子房发育与栽培管理
杂交后10～15天，若发现子房开始发育、表面膨大，确认为授粉成功。4～6个月后子房达到最大。杂交后植株要消耗营养，要注意栽培管理。杂交后6个月内要多施肥，为保证生育正常，十分注意灌水、通风、保温等措施。9月以后随着天气的凉爽，恢复到原来的栽培管理。杂交后到种子完熟（蒴果开裂）需10～12个月，也会受到母本植物的管理状况的影响。
兰花种子采收后，会发生一些生理、生态的变化，种子有后熟作用。对完熟寒兰种子在贮藏中胚的变化的调查后表明，采种时的胚的长度是胚轴的1.3倍，1年后为1.8倍，2年后为2.0倍，3年后约为2.5倍，说明种子在贮藏时胚在不断伸长（在冰箱内5～7℃贮藏）。
2、无菌播种
（1）播种的方法
将适量种子放入含有0.1N的KOH溶液的试管中，用手指按住试管口，充分摇动，约5分钟分离的种子分散在处理液中。最适的处理时间，依杂交组合种类的不同有差别，约5～15分钟。
接着用水充分洗去处理液，再用漂白粉上清液（5%溶液、3分钟）进行灭菌，种子再一次用水洗净后播种于播种培养基中。
播种用的容器为300ml的三角烧瓶，塞子是有孔的、用脱脂棉塞好的橡皮塞。由于东洋兰种子的发芽对空气的要求不是必要的，所以播种后在橡皮塞上部用加热溶解的石蜡滴下密封。
播种后将培养容器置于恒温箱内进行培养，培养条件：温度为23±5℃、光照5000Lx、光照时间14小时。
（2）播种后胚的伸长及发芽
寒兰种子播种后8个月左右才发现有发芽迹象。这时，种子表皮破裂，该时期被称为发芽期。发芽一直持续到播种后10～12个月，播种后9个月以后发芽种子的胚及发芽形成的原球体出现褐变，防止褐变的方法还有待于研究。
（3）根状茎的伸长
寒兰的根状茎转接到新的培养基，根状茎不断地增殖，从根状茎分化出无数侧枝，生姜状根向下伸长。在培养基上继续培养，经数年根状茎仍能继续伸长，但基本上不分化芽。发现有分化的芽后，转接到新的培养基上，幼芽很少褐变，经1次继代培养的根状茎形成的总根状茎数与不转接相比，增加了13倍。因此，根状茎发芽后，应尽早转接到新的培养基中。
与春兰相同，希望寒兰根状茎转接到萌芽用培养基中分化出苗，但在萌芽用的基本培养基中培养没有萌芽。在基本培养基中添加BA2.5mg/L能分化出芽。在添加趾的培养基中，接种约20天后，根状茎的先端开始形成叶原基，60天后形成幼叶，并且肉眼可见。之后，不但在根状茎的先端，而且在根状茎侧面也开始分化出芽，1个根状茎可分化出7～10个腋芽，并形成叶。与根状茎先端形成芽不同，根状茎侧面形成的芽依不同杂交组合类型有所差异。试管苗的苗高达到10～15厘米时，可取出试管苗移栽到盆钵中培育，经5～7年的栽培管理植株可开花。

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