外植体采集一般取当年萌发的带腋芽的枝条做外植体。 取材时间最好在生长幵始的季节,生长末期或已进入休眠期采集 的外植体,对诱导培养反应迟钝或无反应,需要进行低温处理打破休眠,然后才可以进行培养。取材最好选在中午或下午,避开阴雨 天气,可减少外植体污染率。此外,还要注意外植体器官的生理状 态及发育年龄。一般情况下,幼年组织比老年组织具有较高的形态发生能力,也即幼年组织容易培养成功。
外植体灭菌初代培养的外植体通常来自生长在自然环 境下的植株,其表面通常携带有多种微生物,不能直接进行培养, 必须经过表面灭菌处理,获得无菌材料才能进行培养。一般外植体灭菌步骤为:用加有少许洗洁精的水刷洗外植体一用流水冲洗 几分钟至数小时一在超净工作台上.用705^〜75“酒精灭菌30 秒并摇动一用灭菌溶液灭菌,可以添加表面湿润剂吐温-80数滴 并摇动—无菌水冲洗3〜5次—接种。
接种及初代培养将消毒好的外植体切割好后,放入启动 培养基,将外植体诱导出芽或者愈伤组织。不同的苗木材料初始 培养基不完全相同,一般诱导芽时,苗木生长调节物质浓度不需要太高,而诱导愈伤组织时则需要较高浓度的生长素。
继代增殖培养为了获得较多的无菌苗,必须将培养材料 进行大量的增殖培养。通过调整培养基成分、苗木生长调节物质 用量,主要是细胞分裂素和生长素的用量,以及二者之间的比例,达到快速增殖的目的。还可以通过调整培养温度、光照等环境因 子,促进组培苗的生长,达到快速繁殖的目的。
生根培养外植体通过大量增殖后,多数情况下形成无根 的芽苗。有些容易生根的芽苗经过壮苗培养后,也可以获得生长 一致的带根小苗,可以炼苗移栽,省去诱导生根培养阶段,但多数苗木的芽苗需要诱导生根后才能移栽。
生根培养一般需要15〜30天,小苗生长健壮,达到要求就可出瓶炼苗了。
炼苗移栽组培苗长期在弱光、恒温、高湿的特殊环境中 生长,为了适应移栽后的较低湿度及较高的光强,在移栽之前必须 对组培苗进行锻炼以提高其适应能力。炼苗时间的长短要适宜,一般需要锻炼2〜7天。
组培苗经过充分炼苗后,就要开始移栽。移栽常用的基质有 沙、蛭石、珍珠岩、草炭等,可以单独使用,也可以按一定比例混合使用,基质使用前最好用多菌灵等杀菌剂喷淋消毒,或用高温蒸汽 消毒,以保证移栽的幼苗免受病虫侵害。
移栽的具体方法为;将组培苗从培养瓶中轻轻取出,用清水洗 去小苗根系上附着的培养基,一定注意要尽量做到不损伤根系;有 时在栽苗前用多菌灵等杀菌剂浸根1〜2分,对提高移栽成活率也 有明显的效果;小苗栽入营养钵后必须及时浇水喷雾,然后扣小拱 棚保湿保温,移栽初期温度要保持在251左右,湿度在100%’如果外界光照过强,还需要搭遮阴网遮阴;移栽1周后可以逐渐揭开 拱棚通风,等到小植株长出新叶,发出新根后可以完全去掉拱棚; 如果1次移栽苗木较多,还需要定期喷多菌灵等药剂,防止病害发 生。苗木的组织快繁技术性很强,由于篇幅所限,在这里不能详细介绍
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