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苗木培养材料的采集与消毒
苗木组织培养中各种用于接种培养的材料称为外植体。包括苗木体的各种器官、组织、细胞和原生质体等。组织培养所用的材料非常广泛，可采取根、茎、叶、花、芽和种子的子叶，有时也利用花粉粒和花药，其中根尖不易灭菌，一般很少采用。
对于木本花卉来说，阔叶树可在一二年生的
枝条上采集，针叶树种多采种子内的子叶或胚
轴.草本苗木多采集茎尖。
在快速繁殖中，最常用的培养材料是茎尖，通常切块在0.5001左右，如果为培养无病毒苗而采用的培养材料通常仅取茎尖的分生组织部分，其长度在0.111皿以下。
培养材料的灭菌
取来的材料虽经选择，外部总还有不少杂菌，因此,接种前应进行表面灭菌。
①先将材料用流水冲洗干净，最后一遍用蒸馏水冲洗，再用无菌纱布或吸水纸将材料上的水分吸干，并用消毒刀片切成小块。
②在无菌环境中将材料放人70《酒精中浸泡30〜60So
③再将材料移人漂白粉的饱和液或0.01%升汞水中消莓5〜10min.
④取出后用无菌水冲洗三四次。
将已灭菡的材料，用无菌刀、剪、镊等，在无
菌的环境下，剥去芽的鳞片、嫩枝的外皮和种皮胚乳等，叶片则不需剥皮。然后切成0.2〜
50巾厚的小片，这就是外植体。在操作中严禁用手触动材料。
4.4.2接种
接种是指把经过表面灭菌后的苗木材料切碎或分离出器官、组织、细胞，转放到无菌培养基上的全部操作过程。整个过程均须无菌操作。
①接种前先把接种室紫外灯打开，照射灭菌20〜30!^⑴或提前0.5〜1d用髙锰酸钾和甲醛混合液熏蒸。接种台要提前开启。
②操作人员进人接种室前需用肥皂水洗手灭菌，换上经过消毒灭菌的白色工作服和拖鞋，戴上工作帽和口罩。
③进人接种室后用70《的酒精棉球擦拭双手、超净工作台和需放上工作.台的所有器具，防止交叉污染。‘
④点燃酒精灯，将接种钩、剪刀、镊子放人不锈钢盘或瓷盘内烧灼，冷却后备用。接种钩、剪刀、镊子等不使用时浸泡在95‘冗的酒精中,用时在火焰上灭菌，待冷却后使用。每次使用前均需进行用具灭菌。
⑤将外植体放入经烧灼灭菌的不锈钢盘或瓷盘内处理。如外植体为茎段的，将茎段上的叶柄和茎的上下端剪掉一小节;培养脱毒苗的，在双筒解剖镜下剥离切取大小0.2〜0.‘3mm时莖尖分生组织。
⑥烧灼瓶口和塞子，将培养瓶倾斜拿稳，打开塞子，用镊子将接种材料送人瓶内，用接种钩将材料压人培养基中，烧灼瓶口和塞子,并上塞。此过程中要注意避免细菌污染。-
4.4.3培养
初代培养
将从苗木体上分离下来的部分进行第一次培养，称初代培养，也称诱导培养。培养基由于苗木种类的不同而不同，通常是?^5基本培养基加人适量的苗木生长调节剂及其他成分。首先在251下进行暗培养,待长出愈伤组织后转入光培养。此阶段主要诱导芽体解除休眠，恢复生长。
增殖培养
也称继代培养。外植体的增殖是组培的关键阶段,在新梢等形成后为了扩大繁殖系数，需要继代培养。把材料分株或切段转人增殖培养基中，增殖培养基一般在分化培养基上加以改良，以利于增殖率的提高。增殖一个月左右后，可视情况进行再增殖。为了防止变异或突变，通常只继代培养10〜12次。根据需要，一部分进行生根培养，一部分仍继代培养，陆续供用。
继代培养的接种过程与初代培养有两点不
生根培养
.继代培养形成的不定芽和侧芽等一般没有根，必须转到生根培养基上进行生根培养。培养基通常为1/2朋5培养基加人适量的苗木生长调节剂。切取增殖培养瓶中的无根苗，接种到生根培养基上进行诱根培养，一个月后即可获得健壮根系。有些易生根的苗木在继代培养中通常会
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