植物克隆技术基本过程

2012/5/2 19:07:58

一、培养基的制备

1、 母液的配制和保存

为减少工作量一般将各种成分配成比所需浓度高10-100被的母液，用时按比例稀释。在配制大量元素无机盐母液时，要防止在混合各种盐类时产生沉淀，为此各种药品必须在充分溶解后才能混合，同时在混合时要注意先后顺序，把钙离子、锰离子、钡离子和硫酸根、磷酸根错开，以免发生作用，相互结合生成沉淀。另外在混合各种无机盐时，稀释度要大，慢慢混合，同时边混合边搅拌。

配制好的母液分别贴好标签，注明母液号、配制倍数、日期及配制1L培养基时应取的量。母液储存于2-4℃的冰箱中。

2、 培养基的配制

称取规定数量的琼脂和蔗糖，加入一定量的蒸馏水，加热使其溶解。

在烧杯中加入规定量的各种母液，包括生长调节物质和其他的特殊补加物。

将母液混合物加入融化的琼脂中，再加入糖类物质，定容至所需体积，搅匀。

用1mol/L的氢氧化钠和盐酸调节pH值。

趁热将培养基分装到所选用的培养容器中。

用棉塞或封口膜盖住瓶口。

在121-126℃灭菌15-20min。

灭菌后，待压力归零后将培养基取出让其凝固。

二、材料的消毒与接种

1、 材料的选择和确定

不同种类的植物以及同种植物不同的器官对诱导条件的反应是不一致的，因此，在取材时要充分考虑季节的影响、器官的生理状态和发育年龄、取材的部位以及材料的大小。

2、 材料的消毒

一般材料先用自来水冲洗，再用70%的酒精浸泡数秒，倒去酒精，再用0.1%的升汞溶液或2-10%的次氯酸钠溶液浸泡10-15min，后用无菌水冲洗3-5次。

3、 接种

将材料切成所需的形状和大小，接入培养基中。

三、初代培养、继代培养、生根与移栽

1、 初代培养

在初代培养基上，外植体经不同的途径可以诱导出愈伤组织、直接分化出芽或诱导出胚状体。

2、 继代培养

将初代培养产物转入继代培养基上，使愈伤组织分化出丛生芽、不定芽继续增殖、胚状体发育成完整植株。

3、 生根

将健壮的试管苗插入生根培养基中，诱导根的形成。

4、 试管苗的移栽

打开瓶盖，逐渐降低湿度，并逐渐增强光照，进行驯化，以适应环境，经过一段时间的炼苗即可移入盆中。

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