植物组织培养基的配制

2012/5/4 12:29:18

母液的配制和保存
基本培养基母液
在植物组织培养过程中，配制培养基是日常必备的工作。为减少工作量，经常使用的培养基，可先将各种药品配成浓缩一定倍数的母液，放入冰箱内保存，用时再按比例稀释，这样比较方便，且精确度高。母液要根据药剂的化学性质分别配制，一般配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物质等母液。
在配制大量元素母液时，要防止在混合各种盐类时产生沉淀，为此各种药品必须在充分溶解后才能混合。在混合时要注意加入的先后次序，把Ca2+、Mn2+、Ba2+、SO42-、PO43-错开，以免KH2PO4和MgSO4与CaCl2等发生化学反应，相互结合生成CaSO4、BaSO4、Ca3(PO4)2沉淀。另外在混合各种无机盐时，其稀释度要大，慢慢混合，同时边混合边搅拌。在配制微量元素母液时也要注意药品的添加顺序，以免产生沉淀。
铁盐容易发生沉淀，需要单独配制。一般用FeSO4·7H2O和Na2-EDTA配成铁盐螯合剂比较稳定，不易沉淀，铁盐放在棕色瓶中保存比较稳定。
母液要用蒸馏水配制，药品应选用纯度较高的化学纯CP或分析纯AR，以免有杂质对培养物造成不利影响。药品的称量及定容都要准确，在称量时不同的化学药品需使用不同的药勺，避免药品的交叉污染和混杂，每称好一种药剂应立即作一记号，以免重复或遗漏。各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。
配制好的母液应分别贴上标签，注明母液种类、倍数、配制时间，并在记录本上详细记载配制及称取量，以便工作的准确及日后检查。母液最好在2-4℃的冰箱中保存，特别是有机物质要求更严，储存时间不宜过长，如发现母液有霉菌污染或沉淀变质时，应重新配制。
多数植物生长调节剂不溶于水或难溶于水，IAA、NAA、IBA、2，4-D等生长素类和GA3，可先用少量0.1molNaOH或95%酒精溶解，然后再用蒸馏水定容到所需要的体积。KT、6-BA等细胞分裂素类则可用少量1mol/LHCl加热溶解，然后加水定容。植物生长调节剂母液可以在2-4℃的冰箱中保存。配制好的植物生长调节剂母液，也应在瓶上贴上标签，注明名称、浓度、配制日期，以便配制培养基基时计算，准确量取。
培养基配制
将配制好的各种母液按顺序排列，并逐一检查是否有沉淀或变色，避免使用已失效的母液。先取适量的蒸馏水防入容器内，然后依次用移液管按培养基配方要求量吸取预先配制好的各种母液及生长调节剂等，并混合在一起。再将琼脂粉和糖加入其中，溶解混匀后加蒸馏水定容至所需体积。用0.1mol/LNaOH或HCl将培养基的pH调至所需的数值，然后分装到培养容器中。根据材料的不同，装入培养基的量稍有差别，一般培养装入0.7~1.2cm厚，让培养材料能保持原有的状态即可。最后包扎好瓶口或盖上瓶盖，对不同配方的培养基要做好标记，以免混淆。
培养基的pH是影响植物组织培养成功的因素之一。不同种类的植物，其生长发育适宜的pH值也不同，应该根据所培养的植物特性来确定pH值，多数植物要求灭菌前培养基的pH值调节到5.7~5.8。经高温高压灭菌后，培养基的pH值会下降0.2~0.8个的安慰，故灭菌前的pH要高于目标pH值0.5个单位。

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