驱蚊香草的茎尖培养与快速繁殖

2012/5/10 9:23:32

驱蚊香草是天竺葵科天竺葵属多年生常绿草本转基因植物。它不仅能天然挥发出香茅醛、香茅醇等物质有效驱除蚊虫，还能散发出柠檬香气净化空气，其主茎柔软，可以塑造各种盆景供观赏。驱蚊香草能正常开花，但不能自然繁育。在实践中证明扦插成活率低，并且其功能逐代衰退。采用茎尖离体培养技术能有效地保持驱蚊香草种性稳定并能快速增加幼苗数量，具有成本低、时间短、繁殖系数高等优点。
（一）材料和培养条件
1.材料：驱蚊香草茎尖。
2.培养条件：MS为基本培养基。（1）起始和增殖培养基：MS+硝酸铵800mg/L（单位下同）+磷酸二氢钠，H2O150+赤霉素1+KT8+IAA1；（2）生根培养基：1/2MS+Fe盐5ml+NAA0.2；培养基均加蔗糖3％、琼脂0.6％，pH5.6，121℃、0.11MPa下灭菌25分钟。培养温度25（±1）℃，光照12小时/日，光照度2000Lx。
（二）生长与分化情况
1.无菌材料的获得：选取健壮的驱蚊香草幼苗，去掉茎尖，移植到经消毒的盆土中室内培养。15～20天后，取腋芽上长约1.0cm的新生茎尖为外植体。去掉展开幼叶，流水冲洗1～2小时，置超净台上用70％酒精处理10～15秒，无菌水冲洗2～3次，0.1％高汞盐消毒10分钟，无菌水再次冲洗4～5次。无菌条件下用无菌滤纸将材料表面水分吸干，在双筒解剖镜下剥取茎尖，将具有2个最幼小叶原基的茎尖接种于起始培养基上。若出现褐化及时转接，转接2～3次即不再有褐化。接种5～7天后茎尖萌发生长，15天左右可长到高0.5～2cm、带1～2片叶的丛生芽，25天后继代转移进行腋芽增殖。
2.腋芽增殖：将上述丛生芽剪切成带1～2个芽的芽块，去掉基部愈伤组织后，接种到增殖培养基上。培养30天左右，每个芽块的腋芽又萌发成长3cm左右，具4～6片叶的丛生芽。这样重复继代增殖，每个初始培养的丛生芽繁殖15代左右，即可得到大量组培苗。
3.生根与炼苗：无菌条件下切取丛芽中高3cm左右的壮芽转接至生根培养基上，培养20天后不定根开始大量形成，每株平均生根8条以上，生根率达95％以上。为让试管苗逐渐由异养生长向自养生长过渡，打开瓶口倒入20℃温水至1.5cm左右深保湿防污，炼苗4～6天后小心取出，洗净根部琼脂进行移栽。
4.移栽：移栽前将草炭土和珍珠岩按2∶1混合并进行灭菌处理，选择气候温和的时间移栽入混合基质。移栽时用生根粉ABT150mg/L+细土100g/L的溶液浸渍20分钟。缓苗后定期追施1/2MS大量元素的水溶液，注意温度、湿度、光照及水肥管理，移栽成活率可达90％以上。

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