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高尔夫球场草坪线虫病害实验室诊断与成功防治
1 线虫的特性和主要种类
线虫是一种低等动物，属线形动物门，线虫纲。在自然界中分布很广，在水中、土壤和寄主中生活。有的在植物中寄生，也有的在动物中寄生。在植物上寄生的线虫多为专性寄生。一般体形为圆筒状，两端尖。大多数为雌雄同形。体形细小，长为0.030～0.16厘米。少数为雌雄异形，雌虫为梨形或肾形、球形或长囊形。在线虫的口腔内有口针或轴针，状似注射器针头，用以取食。在取食时，将口针刺入寄主细胞，并将唾液输入寄主细胞，吮吸寄主汁液。被线虫取食后的植物组织会发生一些生理变化，也就是在一定程度上产生伤口，这种伤口会引起植物病原菌的寄生和其它腐生菌的侵入，引起发病。
根据线虫的取食方式，可分为两大类：一种是外寄生线虫，这类线虫只有取食时才将口针穿刺到寄主植物的体内，虫体外露，平时生活于土壤中。由于取食与栖息不在一处，它们经常往返于土壤与植物根系之间，而且取食的植株不固定，一条线虫可以危害多株植物。在它们转移危害时，线虫往往成为其它病害的传播介体。 另一种是内寄生线虫，虫在取食时必须进入植物根内部或其他组织内部。
1.1 内寄生线虫
1.2 粒线虫属（Anguina）：大多寄生在禾本科植物的地上部，在茎叶上形成虫瘿，或
者破坏子房后形成虫瘿。
茎线虫属（Ditylenchus）：危害多种植物的地下茎、球茎、块茎、鳞茎，有的危害地上部叶、花、芽或嫩茎组织，受害后表现为坏死或诱发畸形病变。
滑刃线虫属（Aphelenchoides）：有各种危害状，剑叶干尖，干枯卷缩，叶片组织坏死。
异皮线虫属（Heterodera）：又称胞囊线虫属，危害植物的地下部，尤其是根部，病根发育不良，地上部表现植株矮小、枯黄，似缺肥症状。
根结线虫属（Meloidogyne）：寄主范围极广，危害多种植物的根部，受害植物的根变成结状或瘤状肿大，削开结状组织皮层，仔细观察，可见肿根内有梨形的雌虫。受害植物地上部表现营养不良、枯黄、矮小。
1.3 外寄生线虫
剑线虫属（Xiphinema）：齿针很长，基都球大，为瘤状，导环位置低。
长针线虫属（Longidorus）：齿针很长，基部球不大，导环位置高。
毛刺线虫属（Trichodorus）：瘤针弯曲，基部渐粗，形似毛刺。
2.线虫的发生与环境
不同种类的线虫对环境条件要求不同，适于线虫发育和孵化的温度为20－30℃，温度
太高（40－50℃）对线虫生长不利，甚至可以致死。线虫在土壤或植物组织中产卵。孵化后形成幼虫，幼虫侵入寄主后为害。幼虫一般为害四次，即变成虫。交配后雄虫死亡，雌虫产卵，线虫完成其生活史的时间不同，一般为一个月左右，一年可繁殖十几代。
不同种类的线虫对土壤水分的要求不同。大多数线虫在较干旱的条件下有利于生长繁殖；而有些线虫则在淹水条件下有利于生长繁殖。线虫一般在沙壤土中发生严重，但有些线虫则在粘壤土中也发生严重。
3 线虫病害主要症状
线虫对作物的致病作用，除用口针刺伤寄主，产生伤口外，还有线虫在植物组织内穿行所造成的机械损伤。另外线虫在用口针取食时分泌唾液，由于唾液中含有各种毒素和酶，使植株发生各种病变。线虫病害主要症状（1）植株生长缓慢、色泽失常、叶片萎蔫与营养不良症状相似，引起草坪稀疏，整体发黄；（2）局部畸形，植株或叶片干枯、扭曲、畸形、组织腐烂、软化及坏死。茎叶上产生褐色斑点、籽粒变成虫瘿膨大、须根丛生、根部腐烂
4 高尔夫草坪线虫病害的分离与诊断方法
植物寄生线虫主要存在于土壤和植物组织中，分离线虫的方法有许多，要根据线虫的种类、研究目的等来选择适宜的方法。植物寄生线虫的个体很小，除极少数可从植物组织中直接挑出以外，绝大多数需借助特定的工具和方法才能完成。线虫的分离主要是利用它的趋水性、大小、比重以及与其他杂质的差异，采用过筛、离心、漂浮等措施，将线虫从植物组织、土壤中分离出来。
4.1 材料、试剂与仪器
(1) 实验材料 感染线虫病的植物病根、病土等。
(2) 仪器或实验用具 解剖镜、漏斗分离装置、漂浮分离装置、浅盘分离装置、纱布或铜纱、记数皿或平皿、小烧杯、小玻管、旋盖玻璃瓶、40目和325目网筛、线虫滤纸、餐巾纸、挑针、竹针、毛针、毛笔等。
(3) 试剂 线虫固定液。
4.2 分离方法
(1) 直接观察分离
对于个体较大的线虫如根结线虫、孢囊线虫、粒线虫的雌虫等，可直接用挑针从植物组织中挑取，也可在解剖镜或扩大镜观察下直接挑取，对于虫体稍小的线虫如茎线虫、粒线虫的雄虫和幼虫等，需在解剖镜下，用竹针或毛针直接挑取。
取感染线虫的植物病根材料（若是干材料需用水浸泡过夜），剥开皮层，观察里面是否有针头大小、乳白色发亮的颗粒状物。用挑针挑取，置凹玻片上水滴中，在解剖镜或显微镜下观察是否为线虫雌虫。
(2) 漏斗分离法
该方法操作较简单，是目前从植物材料中分离线虫较好的方法。其装置是将直径10-15cm 的玻璃漏斗架在铁架上，下面接一段约 10 cm 的橡皮管，橡皮管上装一个弹簧夹。植物材料切碎用双层纱布包好，浸在盛满清水的漏斗中，静止24h，由于趋水性和自身的重量，线虫就离开植物组织或土壤，沉降到漏斗底部的橡皮管中。
(3) 培育分离法
对于用漏斗分离法不易分离到的线虫，如根结线虫和孢囊线虫的雄性成虫等，可采用培育分离法。从土壤中得到病根后要马上冲洗和培育，因为24h后，有50%的线虫会从根里爬出，冲洗时便被冲掉了。
(4) 浅盘分离法
该方法原理与漏斗分离法一样，但分离效果更好，而且泥沙等杂物较少。用两个不锈钢浅盘套放在一起，上面一个是筛盘，它的底部是筛网，网目大小为10目/英寸，下面一个是稍大的盛水盘。也可在培养皿上放置一个稍小的做成浅盘状的金属网，网与培养皿底部保持一定距离。
(5) 漂浮器分离法
对于没有活动能力的孢囊线虫的孢囊可采用漂浮器分离法（Fenwick-Oostenbrink改良漂浮法），该法需要特制的分离装置。分离时先将漂浮筒内盛满清水，将100g 风干的土样放在上筛中，用强水流冲洗土样，使其全部洗到漂浮筒内，并从环颈水槽流到承接的细筛（100目）中，再用细水流冲洗一会，使漂浮物全部流入细筛。将细筛中的孢囊等漂浮物用水洗入烧杯或三角瓶中，再倒入铺有滤纸的漏斗中，用毛笔收集并观察滤纸上的孢囊。漂浮分离的土样必须要风干，否则孢囊不能在水中漂浮，需用比重小于1的溶剂。
5 线虫危害的记载标准和分级
高尔夫球场草坪常见线虫危害的分级和记载标准
分级
根结线虫危害
的记载标准
胞囊线虫危害
记载标准
茎线虫危害
记载标准
0级
无根结
无胞囊，无病
无线虫
Ⅰ级
有少数根结
感染极轻微（1-5个胞囊）
有极少量线虫和卵
Ⅱ级
大部分根上有根结
轻微感染（6-20个胞囊）
有少量线虫和卵
Ⅲ级
在虫瘤上有再次根结
中度感染（胞囊在20个以上）
有很多线虫和卵
Ⅳ级
互相连接成为根结团块
严重感染
有大量线虫和卵
6 线虫病害的综合防治
6.1合理施肥
注意合理施肥与适时浇水，每年的3-6月和9-11月，根据往年的线虫发生的情况，要勤施磷肥和钾肥，轻施氮肥，深浇水，可以减少线虫危害的发生。
6.2 药物防治
选用线虫净、荧光杆菌（Bacillus fluorescens）、巴斯德氏芽菌属、二硫代氨基甲酸盐（酯）类、土壤熏蒸剂等进行防治。线虫净属环保型线虫防治专用产品，喷施1000倍稀释药液量300-500ml/m2，严重时喷施稀释药液500-1000ml/m2，10天内连用2-3次，能明显控制线虫的危害。
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