秋海棠快速繁殖组织培养技术

2012/6/24 11:30:59

竹节秋海棠（B.President－carnot），叶片、叶柄、茎段，以MS为基本培养基。诱导愈伤组织培养基：（1）MS＋BA3——5mg／L（单位下同）＋NAA0.1——0．5。丛生芽增殖培养基。（2）MS＋BA1．0＋NAA0.1。（3）MS十BA0.5十NAA0.1。（4）壮苗培养基：1／2MS（液体）。（5）诱导生根培养基：1／2MS＋NAA0.2。上述培养基均加3．0%蔗糖、0.8%琼脂，pH值5．8。培养温度（24±2）℃，光照不宜过强，有80Olx左右即可，光照10h／d。
（一）无菌材料获得将竹节秋海棠已平展之幼嫩叶片、叶柄、茎段先用适量洗衣粉对水洗涤，然后用自来水反复冲洗，于无菌条件下用75％酒精药棉擦拭干净，放于饱和漂白粉溶液10分钟，后置于0．1%升汞溶液中消毒2分钟，用无菌水冲洗5——6次，消毒滤纸吸收干表面水分，叶片切成0．5cm见方小块，叶柄、茎段则切成约长1cm左右长条，均接种于培养基（1）上。
（二）丛芽的诱导与增殖接种、培养1周后，叶、叶柄、茎段周围开始膨大、增厚，质地变硬，逐渐形式黄绿色愈伤组织，3周后渐渐分化出小芽点，芽点继续生长，约5周左右形成明显的丛生芽。将丛生芽切成小块，接种于（2）和（3）培养基上进行增殖，小芽丛上不断分化出很多幼芽。叶、叶柄、茎段在两个培养基上增殖速率基本相同，约4周左右继代1次，增殖系数可达6——9。
（三）壮苗在进行大量增殖阶段后，我们停止固体培养而改为液培，将分化芽转接到1／2MS，3周后，可发现生长健壮、个体粗壮的无根苗。这为以后生根、移苗出瓶，提高适应外界环境，增强抗病能力，提供了良好条件，移栽更易成活。
（四）根的诱导将高约3cm、生长健硕的无根壮苗，接种到培养基（5）上。2周后，苗基部长出辐射状白色小根，每株生根5—7条，3周后，根伸长至1．0—1．5cm，生根率达100％。
（五）试管苗的移栽将培养有试管苗的三角瓶盖打开，在实验室通风处炼苗3d，取出小苗，洗去根部残留培养基，种植前根部在0．2%Na2SO4溶液中滞留片刻。移栽到用高压灭菌消毒过的蛭石＋细沙＋园土（1：1：1）的混合基质中，地上部喷施0．1％多菌灵溶液，用薄膜覆盖，每天喷水2次，1周后揭膜，成活率在95％以上。

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