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红豆杉组织培养繁育
组织培养繁育红豆杉
组织培养是利用植物细胞的全能性、和可克隆性。利用红豆杉植株的嫩茎、针叶、树皮、形成层、假种皮、胚等做为植体进行培养研究。
（1）.选用红豆杉优良品种，如东北红豆杉的优质器官（紫杉醇含量较高）做为外植体，接种培养基中，经过愈伤组织形成、生根、幼苗芽丛形成等骤，在实验室可获得大量的组培苗。在经过基质移栽、练苗、检查防疫后成为生产用苗。
（2）.红豆杉的愈伤组织形成的迟与早的比率，在不同的种类和同一种类不同植株之间存在差异。同时与外植体类型、取样部位及采集季节、光照条件、培养基种类等因素有关。在诱导培养基上，东北红豆杉、南方红豆杉、云南红豆杉均能形成愈伤组织。但形成情况因红豆杉的种类及植株的不同也有差异。
曼地亚红豆杉的组织培养：
1.愈伤组织发生：
具有较强分生能力的新生茎段和叶片能够得到很高的诱导率,与萘乙酸(NAA)相比, 2, 4 - 二氯苯氧乙酸(2, 4 - D)在诱导中作用显著。
在继代培养中, 2, 4 - D 比NAA 对愈伤组织生长的促进作用显著, 6 - 苄基腺嘌呤( 6 -BA)对愈伤组织生长的促进作用极显著。在第20 天就开始转移继代和提高愈伤组织与培养基接触面的氧气供给,能够较好控制褐化现象的发生。在含有5mg/L 2, 4 - D、0. 5mg/L 6 - BA及1g/L 活性炭(AC)的B5培养基上,愈伤组织细胞增殖倍数最大达到4. 7,褐化也能得到部分控制。
具有较强分生能力的新生茎段和叶片能够得到很高的诱导率, 与NAA 相比, 2, 4!D 在诱导中作用显著。含有3mg/L2, 4!D+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L 6!BA 的MS 培养基有利于愈伤组织的诱导, AC 对愈伤组织生长作用不明显, 但AC 的使用使愈伤组织颜色保持为绿色, 能很好的抑制褐化的产生过高的活性碳对激素吸附严重, 影响愈伤组织的诱导. 提高NAA 的量可以减少愈伤组织诱导的时间
在继代培养中, 2, 4!D 比NAA 对愈伤组织生长的促进作用显著, 6!BA 对愈伤组织生长的促进作用极显著。在继代培养中, 第20 天就开始转移继代和提高愈伤组织与提高培养基接触面的氧气供给能够较好克服褐化。在含有5 mg/L 2, 4!D +0.5 mg/L 6 BA+1 g/L AC 的B5 培养基上,愈伤组织细胞增殖倍数最大达到4.7, 褐化可得到部分控制。
B5 为基本培养基略优于M S。综合结果是, 以B5+ KT 110 mg/L + NAA 110 mg/L + 2, 42D 210 mg/L (1)B5 比M S 更适合作为曼地亚红豆杉继代培养的基本培养基; (2) 2, 42D 和NAA组合比单独使用更利于曼地亚红豆杉愈伤组织生长;( 3) KT 为愈伤继代较好的细胞分裂素类激素, 在合适的培养基成分和培养条件下, 每30d 的增殖系数达5.2 倍。 在培养基中添加抗竭化试剂, 有利于曼地亚红豆杉愈伤的继代培养, 其合适的种类和浓度分别为: 活性碳500mg/L , 维生素C1000 mg/L , 水解乳蛋白1000Mg/L。
曼地亚红豆杉愈伤组织诱导培养基中, 生长素与细胞分裂素的比例应在10∶1 左右; 2 , 4 - D与NAA 的比例应在2∶1 左右。当年生茎段是进行曼地亚红豆杉愈伤组织诱导的较好外植体, 愈伤组织生长也较好。暗培养条件更有利于愈伤组织的诱导, 诱导率高, 且诱导出的愈伤组织质量好。35 ℃温水浸泡30 min 的处理对抑制褐化有理想的效果, 外植体褐化现象得到了极大抑制。
继代培养基为B5 + 2 mg/L - 2 ,4D + 0.5mg/L 6－BA + 1 g/L AC.
2.有效的芽分化培养基及激素配比：
3.组培苗生根培养基及激素配比
WPM + 6－BA 0.05 mg·L- 1 + NAA1.0 mg·L - 1是曼地亚红豆杉较适宜的生根培养基。
4.腋芽直接诱导丛生芽的方法
MS + 6－BA 0.05 mg·L- 1 + NAA0.5 mg·L - 1是曼地亚红豆杉腋芽增殖启动培养的适宜培养基。细胞分裂素对芽的诱导有利,但对芽的生长抑制作用明显,浓度稍高,有效芽率便明显下降。生长素对芽伸长的抑制作用不明显。不添加生长调节物质的MS(有机物加倍) 培养基是曼地亚红豆杉侧芽继代培养的适宜培养。
5.组培苗炼苗移栽方法
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