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快速繁殖培养材料的选择和处理
为进行微体快速繁殖．被分离用作培养体的部分都称为“外植体”(explant)。外植体因取材的部位不同，又分为若干种。用于微体块速繁殖的外植体主要是器官(organ)．如茎尖、茎、叶、芽、根、种子等。
（一）培养材料的选择
外植体选择适当与否，直接关系到培养的成败。选择外檀体应注意以F几方面：
1、取材的种类和部位：不同植物的不同器官产生不定芽和侧芽增殖的能力不同。要选用容易进行分化、繁殖、形成新埴株的器官的较幼嫩部位。不同树木应采用不同器官的外植体。针叶树常用胚、子叶、幼苗片段；阔叶树多用芽、茎尖、幼苗片段、根和嫩叶等，
2、取材植株的年龄及生理状况：多年生木本植物的年龄越大，培养越困难。很多事实证明大多数树种，从老龄树上采集的外植体，器官发生的能力都很低。总的趋势是，芽、梢及根形成的能力随年龄的增加而迅速下降。因此，研究如何使成熟树木通过再生和复壮，以获得生理上较为年轻的材料（或称复壮材料），显示幼态习性，就具有特殊的实践意义。据国内外资抖报道，采用某些可行的技术措施，还是有效的。如采用树桩上的当年生萌芽条·树干基部萌发的根蘖条；用较老的顶梢作接穗，反复数次（4 5次）连续嫁接到幼嫩植株的根砧上，再取其萌芽条；在主干根颈以上或干下部进行部分环剥，刺激受抑制的芽萌发，形成嫩枝；通过重剪，阻止植株进入成熟期，使其萌条保持幼嫩状态，维持较高的形态发生能力；还可在离体培养时，将外植体先接种在含有细胞分裂素的培养基中培养一定时间，再转移到含有活性炭的培养基中培养一定时间，如此反复3-4次，也可使培养材料复壮；对树木保持高水平的施肥，或喷洒细胞分裂素，也可使其当年生的萌条细胞还童，从而提高器官发生能力。当然要尽可能从幼龄树．1-2年生苗木，根蘖苗采集培养体。树木生命周期长，卫由于立地条件的不同和每年气候的影响，因而导致很大的生理差异。采集营养生长状态的培养材料，以春季芽膨大而芽鳞片尚未裂开时为宜。针叶树还可采用夏末秋初的芽，因此时芽内已形成针叶原基。（你知道文竹的养殖方法吗？）
3．外植体的大小：外植体大，具有较大的再生能力，培养成功率较高，但带病原体也
多易污染；外植体小，带病原体少，但较难培养。用作一般繁殖的外植体较大，可采用l毫米长的茎尖, 2-3毫米长的茎段（带一个芽，或有一个节）．2-5毫米见方的叶片等。如为得到无病毒植株，则必须使用分生组织（生长锥带1- 2个叶原基）。
（二）培养材料的处理
只有对培养材料进行适当的处理，才能得到无苗的外植体。
1、培养材料的预栽培：直接采用野外的材料，由于其生理状况变化大，且难于消毒，往往给培养带来严重后果。因此，最好将取于田间的接穗、小苗再培养在能保持最适光、温的温室或培养室中·以减少生理因素的变化，提高植物形态发生的能力，并定期喷洒杀菌剂，再利用其新生的、健康的材料作外檀体。
2、取材植株的预处理：对必须采用野外生长的材料，可用抗菌素溶液和杀菌剂预先喷洒植株，或用塑料布包裹枝条。
3、培养材科的贮藏：很多树木的营养枝，在一年内不同时期的生理状况变化较大，故每年只有在特定的短期内采集材料，才适于培养。因此，为在整年内能保证材料的供应使用，将采得的培养材科进行贮藏是完全必要的。简便的方法是，将枝条放在纸带里，外面再套塑料袋。这样纸袋既可吸收枝条表面过剩的水分，从而减少真菌的感染，塑料袋叉可限制枝条内水分的丧失。然后将塑料袋冷藏(温度2-4℃)。
4、外植体的预处理：接种前，先切除、刺去外植体的外层，如种皮、外屡的芽、鳞片及老叶。
5、外植体的表面消毒：为彻底杀死外埴体表面附着的各种微生物，避免污染，必须对外植体表面进行严格消毒。由于外植体是活的植物组织，消毒时，既要求把表面附着的微生物杀死，叉不致伤害或杀死组织。要达到这个要求是不容易的。解决的途径是，根据不同树种，不同培养材料对试剂的敏感程度，采用与之相适应的药剂、浓度和处理时间。选用消毒剂的原则，既要消毒效果好，又要消毒后容易被冲洗掉，或者能自动分解为低毒或无害性物质·对组织的分化与生长没有不良影响。最常用的表面消毒剂是次氯酸钙和次氯酸钠，使用时分解成具有杀菌效能的氯气，随后就散失到空气中。对组织的毒害钙盐比钠盐小。但次氯酸钙与空气中的二氧化碳起作用，故不稳定。次氯酸盐的有效性与其pH值有关。pH为6左右，有效性大，超过8则活性极小。使用消毒剂氯化汞时，有时为除去材料表面吸附的汞离子，要用氯化钾来冲洗。表面消毒通常是将酒精与其它消毒剂结合使用。不同种类的外植体，表面消毒的顺序及方法不同。依材料的种类及老嫩而异。对暴露于空气中的茎，叶及埋于土中的根，要彻底消毒较为困难。目前，常用的消毒方法是：先用自来水冲洗，用小软刷去掉尘土，再用吸水纸吸干；然后用70%酒精漂洗数秒钟。困70%比其它浓度的酒精的杀菌力要强。漂洗时间要严格掌握，时间稍长就会把材料组织杀死；再用表面消毒剂浸泡数分钟，或更长一点时间。常用的消毒剂有0.1-0.5%氯化汞2%（重量／体积）溴水．2-10%次氯酸钠；最后用无菌水清洗数次，用无菌纸吸干水后接种。对种子及果实的消毒比较容易，可用纯酒精漂洗。或用2%的次氯酸钠溶液浸10分钟，再用无菌水冲洗后，剖取里面的种子或组织接种。
6、外植体的切取和接种：消毒后井用无菌纸吸干的外植体，在无菌条件下，用解剖刀
切取所需大小的茎、叶切段。如要切取分离茎尖的生长点组织，要在解剖镜下，用解利针、
解剖刀、镊子小心除掉幼叶或叶原基，使生长点组织露出。分离时注意不使茎尖受伤。切
取外植体时，切面经常会很快变成棕褐色，这是受伤细胞中酚对有毒苯醌氧化作用的结果。
为使细胞的压破降到最小，解剖刀要尽量锐利。为此·解剖刀的消毒最好采用先在酒精里
沾一下，再点火烧尽。这种用酒精及其燃烧产生温热结合的方法，既能使解剖刀灭菌，又
不会因过热使刀刃变钝。为防止组织变色，可采用某些行之有效的办法，如切取外植体时．
把组织漫于水中；用各种抗氧化剂、除莠剂和聚乙烯吡咯烷酮处理。
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