快速繁殖培养基的配制

2012/7/22 9:39:17

1、配制母渡：为了减少各种物质的称量次数，一般接培养基配方中规定的各种化合物的重量扩大1 0倍、I100倍或1000倍称量溶解，成为浓缩液，称为母液。可配制为各种母液，如大量元素母液、微量元素母液。也可配制单种维生素、植物生长素的母液。配制大量元素母液，应注意按配方中的排列顺序，对每种化合物以其10倍（或1 00、1 000倍）用量单独称出，分别溶解，再按先后顺序混合在一起，避免发生反应沉淀。最后加蒸馏水定容到1升。配制微量元素母液为达到称量精确·以每种化合物的100倍或1000倍量分别称取溶解，再混台在一起。注意铁盐要单独配制；维生素，植物生长素、细胞分裂素及氨基酸等都要单个分别称量溶解，定容后备用。各种母液为避免变质，均应保存于冰箱中。对较难溶于水的物质，如植物生长素类，可用少量0.1N氢氧化钠溶解，或用95%酒精溶解，再加蒸馏水稀释定容。细胞分裂书宜先用少量0.5N或1N盐酸溶解，加蒸馏水定容。叶酸宜先用少量的稀氨水溶解后加水定容。

2、配制培养基：根据培养基配方中各种物质的具体需要量，用量筒或移棱管从各种母液中逐项按昔吸取。培养基中各种物质的计量单位，我国多用毫克／升。国内外有些文献也有用mol/L为单位。即每升溶液中所含该成分的质量。就是将各种成分的摩尔质量(g/Mol/l乘以每升溶液中该成分的物质的量浓度(mol／L)。如该成分的浓度的单位为mmolL或Umo/L，则每升中所含该成分的质量分别为毫克或徽克。（你知道文竹的养殖方法吗？）

母液的吸取量按下式计量：

母液吸取量（毫升）一每升培养基要求含量／每毫升母液含量

先按量称琼脂，加水后加热，不断搅拌使溶解，然后加入吸取的各种物质的母液及蔗糖，使茸均匀混合·最后用蒸馏水定容。随即用pH计或pH试纸测定pH值，用0.IN NaOH或IN HO作缓冲剂将培养基的pH调至5.6-5.8。不同植物的外植体对pH值的要求不同。加I%PB74作缓冲剂，对预防培养基pH的波动有良好效果。通常培养基的pH值，在灭菌前后，接种外植体后，均会产生一定变化。用分装器或漏斗将配好的培养基分装入供培养用的事先已洗净烤干的玻璃容器（三角瓶或试管）内。装量为容器的1/4-1/5，塞上棉花塞，或用铝铂纸或移量纸包扎瓶口，用玻璃铅笔标上记号。

3、培养基的灭菌：固体培养基常用高压灭菌法。将包扎好的培养基，放入高压消毒锅中，在锅内温度高达120C，压力稳定在0 8--1.1公斤／厘米：，灭菌15-25分钟．灭菌时间过长，培养基中某些成分易失效。经过灭菌的培养基放在4-5C的无菌接种室内待用，存放时间不宜太长，一般要在两周内用完。

（三）培养基配方

1 934年美国科学家怀特（White）首先研究出组织培养的培养基。以后斯可格(Skoog)、

米勒(Miller)，斯蒂瓦特(Sieward)等都提出不同的培养基配方。不同培养基有其不同的特

点，应通过分析和进一步试验研究，为不同檀物的不同器官，不同培养阶段找出最佳配方。

目前在木本植物离体培养中，应用较广的培养基主要有：

I、MS培养基：在术本植物组培中应用最为广泛。其特点是无机盐（硝酸盐、钾盐和铵盐）含量较高；微量元素种类较多，浓度也较高。适合许多树种对营养的需要，故分化快，生长好。近几年我们选择Ms培养基用于10余种针阔叶树的离体培养均获得成功。

2、BL培养基(1965)：其成分基本同MS培养基。唯去掉甘氯酸，盐酸硫胺素、盐酸吡哆素，增加天冬酰胺。

3、ER培养基(1965)：与MS基本相似。但磷酸盐含量比Ms高一倍、微量元素却低得多。

4、H培养基(1967)：大量元素无机盐约为MS的一半、磷酸二氢钾及氯化钙稍低；徽

量元索含量较MS高但种类少，维生素种类较多，

5、培养基(1968)：硝酸钾含量较高，不含铵态氮，盐酸硫胺紊含量甚高。盐酸毗

哆素含量也较高。

6、Ns培养基(1975)：硝酸盐含量高，不含铵态氮，盐酸硫胺素含量较高。

7 、SH培养基(1972)；硝酸钾含量较高，铵与磷酸足以NH4H2PO4提供的。

8、WH培养基(L943)：和改良WH培养基(1981)只含硝态氮，无机盐含量低。

9 、WS培养基(1966)：无机盐含量低，微量元素种类少。适用于某些树种的生根培养。

10、 HE培养基(1953)：钾盐和硝酸盐是通过不同化合物来提供。无机盐含量稍低，

11、ls培养基(1965)：与MS培养基类似。大量、微量元素及铁盐同MS．有机物质中去掉甘氨酸、烟酸和盐酸毗哆素。

可见，各种培养基的成分，总盐分浓度，各种盐类的浓度及各元素间的比例都有很大差异。它们对外植体的形态发生及生长速率都有根大影响。一般在芽的形成和增殖阶段需要选用较高的总盐类浓度的培养基。而诱导生根则需较低的总盐浓度。不同树种芽形成所需的最佳无机盐总浓度可相差1-3倍。

上述11种培养基，常在木本植物离体培养中采用，获得良好的效果。这些培养基中各种无机盐及有机成分含量详见表9-1。

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