铁皮石斛的茎段快繁

2017/7/23 10:42:19

铁皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo是兰科石斛属多年生附生草本植物，因其茎节处呈黑褐色，又名黑节草，具有益胃生津、滋阴清热、清咽利嗓，提高人体免疫能力、抗肿瘤、抗衰老等功效，主要分布于云南广南、邱北、马关、文山及怒江与恩梅开江的分水岭一带，海拔1600米以下，以及江南各省。多附生在亚热带人迹罕至的深山密林阴湿悬崖峭壁处、树上或长青苔的岩石上。
铁皮石斛的种子极小、无胚乳，自然条件下需与某些真菌共生才能萌发，很难用实生苗栽培；而传统的分株、扦插等方式的繁殖率极低，加上人为的过度采挖和破坏生态环境，其资源已濒临灭绝，因而被国家列为重点保护的药用植物之一，铁皮石斛组织培养快速繁殖被国内外学者广泛关注。铁皮石斛的茎段快繁直接取材于幼嫩茎段，具有取材易、速度快、污染率低、繁殖系数高等优点，可在短期内为生产提供大量栽培用苗，因而能有效保护这一宝贵资源。
1．外植体的消毒
石斛茎段在无菌操作台上用75％的酒精进行表面消毒，去掉灰尘，再用0.1％的升汞灭菌5～8分钟，用无菌水冲洗3次，在此过程中应不断摇晃烧杯，使其充分灭菌。
2．试验过程
将已经灭菌的石斛茎段，在无菌条件下切成至少带有一个茎节的茎段，接种于诱导培养基中诱导出芽，将芽再诱导出原球茎，原球茎再分化，再壮苗，便可将生长健壮的植株移栽。
3．培养基
基本培养基为N6，附加0.75％琼脂，3％白糖，PH值为5.8，培养基进行常规高温高压灭菌，温度为121℃，1.1Mpa，15分钟即可。激素添加如下①诱导茎节发芽：N6＋BA2.5毫克／升；②诱导芽形成原球茎：N6＋BA2.5毫克／升＋I－BA 0.5毫克／升；③诱导原球茎分化为植株：N6+BA 1.5毫克／升+NAA 1.2毫克／升＋香蕉汁5％；④生根壮苗培养：N6+NAA 2.5毫克／升+土豆汁10％。
或基本培养基为MS，附加0.75％琼脂，3％白糖，pH5.8。（1）芽增殖培养基：MS＋NAA 0.1～0.5毫克／升＋BA0.5～2.0毫克／升；（2）壮苗培养基：MS无激素培养基；（3）生根培养基：1/2MS+IBA0.1毫克／升。
4．培养条件：
温度控制在25±1℃，日光灯照射，每天12小时。
5．移栽
移栽时先将已经长大的石斛种苗取出，用清水洗去根部的培养基，洗净为止，动作要轻，避免损伤其根和叶。然后栽种在以矿质岩：泥炭土为1∶1的基质中。放在遮荫棚里练苗一周，便可正常管理，保持湿度80％，温度不可超过35℃，不接受长时间的阳光直射。

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