钻石玫瑰组培快繁技术研究

2010/5/9 10:28:33

钻石玫瑰（Rosasp.），蔷薇科蔷薇属多年生花卉，为微型月季的一种，因其花枝短小,花朵如豆扣般大小,故美其名曰“钻石玫瑰”或“袖珍玫瑰”。钻石玫瑰除具有一般月季花容秀美、芳香馥郁、四季常开等特点外,还具有分枝多、株型矮小紧凑、耐寒、耐热、适应性强等优点,是现代城市绿化不可替代的材料，深受人们的喜爱[1]。目前钻石玫瑰主要靠扦插繁殖,繁殖率低、速度慢,且后代出现品质降低现象，远远不能满足市场的需求。为此,我们开展了钻石玫瑰组培快繁技术研究,拟用工厂化育苗措施解决常规生产所面临的问题。
1材料与方法
1.1外植体的建立
供试材料采自重庆市园林绿化科学研究所品种圃从北京引进已栽培驯化2年的钻石玫瑰品种“紫色时代”当年生植株。
剪取优良健壮株当年生枝条中段带侧芽的未木质化或半木质化茎段,用毛刷蘸肥皂水轻轻刷洗后流水冲洗1～2h,再剪成1.0～1.5cm左右带腋芽的茎段;超净台上，将茎段先用70%酒精溶液浸泡30s,无菌水冲洗2～3次，再置于0.1%升汞溶液中消毒9～12min,然后用无菌水冲洗3～4次,以备接种。
1.2离体芽的诱导培养
将无菌茎段接种于诱导培养基上诱导萌芽。诱导培养基以MS为基本培养基,附加不同浓度的细胞分裂素6-BA和生长素NAA，共组成5种培养基：MS+6-BA0.30mg/L+NAA0.10mg/L,MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10mg/L,MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.20mg/L,MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.20mg/L,MS+6-BA2.00mg/L+NAA0.10mg/L。每种培养基均接种20个离体芽,培养6周后统计芽诱导分化率（见表1）。
1.3丛生芽的继代增殖培养
将诱导培养基上已萌发的嫩芽切下转接到4种继代培养基中继代增殖。继代培养基分别MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10mg/L,MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.10mg/L,MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.20mg/L，MS+6-BA2.00mg/L+NAA0.20mg/L。每种培养基接种30个嫩芽,接种时单芽茎段长0.5～1.0cm左右,培养3周后统计丛生芽的数量以及高于2cm的芽数（见表2）。
1.4试管苗的生根培养
选取继代培养中生长健壮的丛生芽,剪成1.2～1.5cm长的单芽茎段，转接到生根培养基上。培养基配方为：1/2MS+NAA0.10mg/L，1/2MS+IBA0.1mg/L，1/2MS+NAA0.20mg/L，1/2MS+IBA0.20mg/L，1/2MS+NAA0.50mg/L，1/2MS+IBA0.50mg/L。每种培养基接种30个茎段，接种15天后统计幼苗生根情况（见表3）。
以上MS培养基中的白砂糖浓度均为30.0g/L，1/2MS培养基中白砂糖浓度为20.0g/L，琼脂均为3.5g/L,pH5.8，培养室温度23（±2）℃,光照强度2000～2500Lx，光照时间10～12h/d。
2结果与分析
2.1离体芽的诱导结果
钻石玫瑰离体芽的诱导较慢,接种4周后离体芽才开始萌动，但芽萌动后的生长情况因培养基内激素浓度的不同而不同。由表1可知，MS+6-BA0.30mg+NAA0.10mg/L培养基丛生芽少,由于6-BA浓度太低，芽分化相对较差，分化率为70%,但丛生芽在培养基中生长健壮；在MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.20mg/L培养基上,丛生芽相对较少,芽分化率为105%,且丛生芽生长细弱，说明该培养基中6-BA和NAA浓度配比不当；在MS+6-BA2.00mg/L+NAA0.10mg/L培养由于6-BA浓度过高,离体芽萌动后仅产生愈伤组织,未分化出丛生芽；MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10mg/L和MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.20mg/L两种培养基上,20个离体芽分化出的丛生芽分别为49个和39个，分化率分别达245%和195%,且丛生芽生长健壮。重复试验，筛选出适宜离体芽诱导的培养基为MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10～0.20mg/L。
2.2丛生芽的继代增殖结果
从表2可以看出，钻石玫瑰在所采用的4种继代增殖培养基上培养3周后，芽的增殖倍数和大于2cm芽的比率存在差异。其中：MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.10mg/L和MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.20mg/L两种培养基上，增殖的丛生芽多，且芽生长健壮，芽的增殖倍数分别为5.67倍和5.2倍，大于2cm的芽占75.29%和71.79%，明显高于其它培养基；在MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10mg/L培养基上，芽生长细弱，丛生芽少，增殖倍数仅为2.1倍，大于2cm的芽占18.75%；MS+6-BA2.00mg/L+NAA0.20mg/L培养基由于6-BA浓度过高，继代芽产生愈伤组织后停止生长分化。重复试验，筛选出适宜钻石玫瑰继代增殖的培养基为MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.10～0.20mg/L。
2.3试管苗生根培养结果
从表3看出，钻石玫瑰在所用的6种培养基上培养15天后统计结果，试管苗的生根率为13.3%～90%，生根数为4～243根，平均根长为0.26～1.5cm。在1/2MS+NAA0.20mg/L、1/2MS+NAA0.50mg/L、1/2MS+IB0.20mg/L、1/2MS+IBA0.50mg/L培养基上，试管苗10d开始生根,生根率分别为60%、23.3%、13.3%和30%，根数分别为90根、14根、4根和27根，平均根长分别为0.35cm、0.26cm、0.6cm和0.45cm，且由于生长素浓度过高，15d后根均变成深褐色，停止生长后慢慢死亡。在1/2MS+IBA0.10mg/L和1/2MS+NAA0.10mg/L培养基上，培养9d开始生根,根系发达,发育良好,生根率达63.3%和90%,平均根数8根和9根,平均根长1.1cm和1.5cm，均明显高于上述4种培养基，且小苗和根长势均良好。重复试验，在设计的6种培养基中,1/2MS+NAA0.10mg/L培养基上生根最好。
2.4生根试管苗的驯化移栽
将生根试管苗放在室外光线明亮的地方，闭瓶炼苗2～3d，再逐渐开瓶炼苗2～3d，让植株经受试管外环境的锻炼后取出试管苗洗净基部粘附的培养基，移植于珍珠岩：腐殖土：炉杂为1：3：3的基质中，浇浓度为0.8g/kg多菌灵溶液，遮荫保湿，空气湿度保持在60%～70%，当植株萌发新根后让其逐渐见光，并降低湿度，直至暴露在外界条件下，移栽成活率可达75%～80%。
3小结与讨论
3.1细胞分裂素6-BA和生长素NAA作为外源激素加入培养基后,对钻石玫瑰离体芽的诱导及分化影响十分显著。适宜钻石玫瑰离体芽诱导的培养基为：MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10～0.20mg/L；最佳继代增殖培养基为MS+6-BA1.00mg/L+NAA0.10～0.20mg/L。
3.2钻石玫瑰在试管内生根需较低浓度的生长素NAA和IBA，当NAA或IBA大于2.0mg/L时，钻石玫瑰虽能产生根,但根随即变褐停止生长后死亡。试验结果表明，诱导钻石玫瑰试管苗生根的最佳培养基为1/2MS+NAA0.10mg/L，生根率可达90%。
3.3用组织培养方法可以提高钻石玫瑰的繁殖速度，且植株根系发达，苗木生长健壮、整齐,是批量繁殖钻石玫瑰商品苗的一种好方法。

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