盆栽山茶花的组织种胚培养法（下）

2009/4/2 17:52:31

 3、种子的预先处理：将捡回的因病虫害危害的或生理原因而掉落的杂交山茶果实，或将采摘的正在成熟过程中的茶花杂交果实，放入塑料袋内并置于冰箱里保存几个星期，使种子完全后熟。然后从果实中剥出种子，放在阴凉处干燥1～2天，使种皮和内膜与种胚分开，容易剥离。将种子，特别是由掉落地面的果实中剥出的种子，放在0.1%升汞溶液中浸泡20分钟，或者用75%的酒精溶液擦洗干净，同时用洗洁精进行清洗，轻轻振荡，取出种子，用灭菌水冲洗数次，放在干净卫生纸上晾干。将种子放在用升汞水擦过灭菌的玻璃板上，轻轻用小锤敲开种壳。用灭菌镊子取出种仁，用小刀剥下种仁的内膜。如果种子很干燥，在进行此步之前，先要将种子放在自来水中浸泡1小时，再按上述步骤操作。这样种仁外的内膜就容易剥下来了。
    4、种胚的灭菌培养：将种仁外的内膜剥下，使之成为一个带子叶的种胚。然后，将种胚放入瓶中，加入3/4体积的0.1%升汞液及2滴洗洁精，盖上瓶盖，有规律地震荡10分钟。再把升汞液倒出，加入同样体积的灭菌水，盖上瓶盖，摇动5分钟。重复这种操作两次以上，然后将灭菌水倒干净，盖上瓶盖。至此，该种胚已成为灭菌种胚了。用灭菌的长柄小勺将此种胚在无菌操作条件下，转移到事先已灭菌的盛蛭石介质的玻璃罐头瓶内，每瓶一粒种胚，立刻旋紧瓶盖。将已放入种胚的罐头瓶放在浅盘上，盖上一块干净的塑料布，以遮挡灰尘。然后，放在温度为20～25℃，有散射光而不是太阳光直晒的条件下培养，例如窗台前。如果放在日光灯下，每天照射12～14小时，效果更好。经过一段时间培养，种胚开始萌发，当长出2～3片叶子时，就可将其转移到小盆中，合理地浇水施肥，苗上倒盖上一个玻璃杯和一块塑料布，以保持湿度环境。但要注意的是，这种玻璃罩或塑料布，要每隔一段时间掀开一下，使实生苗逐渐得到锻炼，增强抗性。这样，新的杂交幼苗，就培育出来了。
    5、注意事项：
    （1）创造无菌操作条件：在把种胚转移至蛭石介质瓶中时，所需的无菌操作条件可以自己动手加工。比如可用硬纸箱上面盖上透明塑料布，侧方开两个操作孔，制作成一个简易的接种箱。转移工作在此箱中进行。
    （2）小心操作：升汞液有毒，操作要特别小心。
    （3）高压灭菌要确保安全：高压灭菌时，应注意压力锅排气孔是否畅通，保险部件是否完好有效，以确保安全。灭菌时间，应从排气孔放气后开始计时。

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